近来，韩春雨 在预印本网站 BioRxiv 宣布了一篇关于 基因修正 的新论文：Background free tracking of single RNA in living cells using catalytically inactive CasE.
该研讨开发了一种 新型的活细胞 RNA 追寻成像东西——VN-dCasE-VC，作用和可用性更强。
该论文署名单位为 河北科技大学基因修正研讨中心 ，通讯作者为 韩春雨 ，榜首作者为 顶峰。
前情回顾
2016 年 5 月 2 日，韩春雨 （河北科技大学） 作为通讯作者在世界顶级学术期刊 Nature Biotechnology 杂志宣布了题为：DNA-guided genome editing using the Natronobacterium gregoryi Argonaute（运用 NgAgo 进行 DNA 引导的基因组修正）的研讨论文。
该研讨称 NgAgo 对真核生物（包含人）具有基因修正能力。该研讨成功很快在世界范围内爆火，韩春雨教师此前籍籍无名，简直一夜之间成为学术界网红，被赞誉为“ 在三流校园取得世界一流原创成果，打破世界基因修正技术垄断”。
该论文通讯作者为 韩春雨 ，榜首作者为 顶峰 ，浙江大学教授 沈啸 为共同通讯作者，但在后续修正版别中，沈啸从作者名单中去除了。
2016 年 8 月，河北科技大学建立基因修正研讨中心，方案投入资金逾 2 亿元。但 NgAgo 的研讨成果引发广泛质疑，2017 年 8 月 3 日，韩春雨 撤回 该论文。2018 年 8 月 31 日，河北科技大学 取消 了韩春雨所获得的荣誉称号，停止 了韩春雨团队承担的科研项目并收回了科研经费，收回 了韩春雨团队所获校科研绩效奖励。
2019 年 4 月 4 日，预印本网站 BioRxiv 刊登了一篇来自 美国 普渡大学 研讨人员的研讨论文，标明 NgAgo 经过核酸内切酶活性介导增强大肠杆菌的同源重组。BioWorld 榜首时间解读并报道了该论文，该研讨标明 NgAgo 可以修正原核生物，但不能修正真核生物基因组。
韩春雨最新论文的解读
CasE是Ⅰ- E 型 CRISPR 复合物的核心成分，它经过结合特定的茎环区域独自处理 pre-crRNA，称之为 CasE Binding S，简称为 CBS。CasE 保守 His20 参加催化活性，ΔHis26-TtCse3 突变 的CasE（dCasE）则失去了催化活性，但仍然与其靶标紧密结合。
在该研讨中，经过将 split 荧光与 dCasE 的 N 端和 C - 结尾（ΔHis20）交融，构建了活体 RNA 盯梢东西 VN-dCasE-VC。该体系 仅在存在靶 RNA 时才发出荧光，从而增强信噪比。
在活细胞中进行 可视化的 RNA 追寻，不需要特定的亚细胞散布。CasE-GFP 和 dCasE-GFP 在 HEK293T 细胞中的高水平表达和均匀散布标明 CasE 和 dCasE 适合于活细胞中的 RNA 操作。
为了测验 CasE 在哺乳动物细胞中表达时是否具有强活性，作者构建了“关闭”报告基因质粒 CBS-GFP-N1。它由 5 ′-UTR 中的 GFP mRNA 和 CasE 结合位点（CBS）组成。当 CasE 被引入体系时，GFP 表达水平急剧下降。
为了进一步测验 CasE 活性，作者还构建了“敞开”报告基因质粒 RED-16×CBS-Lin28-C1，其间 CBS 插入 RED 单体基因的 3 ′-UTR 区和 Lin28 的上游。Lin28 是 RNA 核保留信号，在其 3 ′-UTR 中具有 lin28 信号的 RED 单体 mRNA 简直不能翻译成蛋白质。
CBS-CasE 依赖限制性堵截 lin28 信号并从核释放靶 mRNA 用于翻译（图 1E 和图 1F）。这些标明CasE 可以结兼并切割哺乳动物细胞中的 CBS。
为了将 dCasE-CBS 相互作用设计到 RNA 追寻体系中，作者经过将 split-FP5- 7 与 dCasE 蛋白结合。发现一个版别，即 VN-dCasE-VC 很难发出荧光，这可能是因为不正确的折叠或不稳定的状态，可是当与靶 RNA（CBS）结合时，可以 在荧光显微镜下清楚地捕获荧光信号，即便 VN-dCasE-VC 表达质粒的转染剂量十分低。
这个示意图像的，真是一言难尽 …
接下来作者运用 VN-dCasE-VC 体系追寻哺乳动物细胞中过表达的 β - 肌动蛋白 （β-Actin） 的 mRNA，VN-dCasE-VC 体系在细胞质中显示出强荧光。此外还观察到，向靶 mRNA 添加更多 CBS 可改进信号，荧光追寻更明晰，因而，可以经过增加 CBS 的数量来检测低丰度的 mRNA。
总的来说，韩春雨 团队发明了一种 新的 RNA 追寻东西，将其命名为VN-dCasE-VC。该体系可以追寻活细胞中没有背景的特定 RNA，经过荧光将其可视化。
现在已有两种活细胞 RNA 追寻成像东西，一种是 MS2，一种是 Cas13a，韩春雨团队开发的 dCasE 体系，成像作用因为 MS2，而且，dCasE 蛋白的分子量为 22kDa，远小于 Cas13a 的 130kDa，dCasE 的小分子量更简单递送至细胞内，因而更适合用于活细胞的 RNA 追寻。
通讯作者：韩春雨
榜首作者：顶峰
