最近放榜的国自然项目中，表观遗传组最耀眼的当属 m6A 了。从 2015-2019 年呈现逐年递加的趋势，从上一年的 55 项倍数添加至至少 135 项。
Pubmed 上关于 N6-methyladenosine 或 m6A 等关键词查找在 2019 年至今共 214 篇文章。
一起在上一年大火的 lncRNA 项目中，今年有 475 项立项，有直追老大哥 micro RNA 的趋势。
在我们都担心热点人人都追，而自己只能做炮灰的时分，已经有人开端将热点会集研讨，在热点中创造新意。接下来这篇文章就完美结合了 lncRNA 和 m6A 两大热点。着这篇名为 m6A-induced lncRNA RP11 triggers the dissemination of colorectal cancer cells via upregulation of Zeb1 的文章宣布在 10 分的 Molecular Cancer 上。让我们一起来梳理一下这篇文章思路。
1. 表型研讨——RP11 在结直肠癌细胞和安排中上调
首要作者运用微阵列分析了正常和结直肠癌安排对中 lncRNA RP11 的升高，qRT-PCR 也高度富集。随后比较了 32 名个别患者结直肠癌安排中有 30 个 RP11 表达明显添加。TCGA 数据证明 RP11 在结肠癌和直肠癌中的表达明显大于相邻正常安排，并且 RP11 在多种结肠癌细胞系相对较高。定论：在结直肠癌细胞和安排中 lncRNA RP11 添加。
2. 细胞表型，动物试验——RP11 在体外和体内都会引发结直肠癌细胞的分散
在 HCT-15、HCT-8、DLD1、SW480 和 RKO 细胞中过表达 RP11(RP11 低表达细胞）。作者使用划痕试验和 Transwell 试验证明 RP11 能添加 HCT-15 细胞的体外搬迁和侵袭。过表达 RP11 的结直肠癌细胞呈现梭构成纤维细胞的外观提示 RP11 可能调理上皮间质转化和癌症搬运。体内试验进行了裸鼠 RP11- 过表达 HCT-15 肿瘤异种移植，进一步确认 RP11 对体内搬运的影响。定论：RP11 能促进结直肠癌细胞的体外和体内传播并诱导上皮间质转化。
3. 下流机制研讨——Zb1 的上调介导 RP11 诱导的结直肠癌细胞的分散
接下来作者分分出 RP11 过表达添加了 HCT-15 和 HCT- 8 细胞中上皮间质转化因子 Zb1 的表达，而敲降 RP11 下调了细胞中 Zb1 的表达。RP11 过表添加了肿瘤异种移植物中 Zb1 的表达。蛋白质印迹分析证明，Zb1 敲除削弱 RP11 诱导的 FN 上调和 E -Cad 下调。定论：Zb1 的翻译后上调参加 RP11 诱导的结直肠癌细胞的传播。
4. 下流机制研讨——Siah1 和 Fbxo45 的下调介导 RP11 诱导的 Zb1 的上调
作者使用免疫沉淀和质谱分析标明 RP11 诱导的 Zb1 上调不是因为直接相互作用。之后检测了泛素 - 蛋白酶体系统中 7 个报道因子的基因表达水平，标明 RP11 过表达明显下降了 Siah1 和 Fbxo45 的表达水平，western 试验证明。RP11 过表下降肿瘤移植物中 Siah1 和 Fbxo45 的表达。Siah1 和 Fbxo45 的过表达削弱了 RP11 诱导的 HCT-15 细胞中 Zb1 的上调。然而，RP11 质谱分析没有显现 HCT-15 细胞中 RP11 与 Siah1 或 Fbxo45 之间的结合。定论：RP11 下调 Siah1 和 Fbxo45 的基因水平，但不与 Siah1 或 Fbxo45 蛋白结合。
5. 下流机制研讨——RP11 通过构成 RP11-hnRNPA2B1-mRNA 复合物来调理 Siah1 和 Fbxo45 的表达
RNA pull-down 和 RIP 试验标明 RP11 与 hnRNPA2B 是直接相互作用的蛋白质。RIP-PCR 显现，在 RP11 过表细胞中，hnRNPA2B1 与 Siah1 和 Fbxo45 的 mRNA 的结合非常明显。定论：RP11 通过构成 RP11-hnRNPA2B1-mRNA 复合物来调理 Siah1 和 Fbxo45 的表达。
6. 上游机制研讨——m6a 润饰参加结直肠癌细胞 RP11 的上调
m6A RNA RIP q-PCR 显现 RP11 过表细胞系的 m6A 抗体水平高度富集，且 m6A 甲基搬运酶 mettl3 的过度表达，一起 m6A 的脱甲基化酶 alkbh5 的过表达下降了 rp11 的表达。一起 mettl3 过表达添加了 hct-15 和 hct- 8 细胞中 RP11 与 hnRNPA2B 之间的结合，标明 m6A 活跃调理细胞中 RP11 的表达。定论：6a 润饰可以通过添加 RP11 核积累来添加结直肠癌细胞中 RP11 的表达。
7. 临床表型——m6A/RP11/Zb1 轴与结直肠癌的体内发展
在结直肠癌安排中，METTL3 和 Zb1 的表达呈上升趋势，恶性转化过程中逐渐升高，Fbxo45 的表达呈下降趋势，证明了 m6A 能调理 RP11 的表达，进一步，RP11 调理 Siah1-Fbxo45/Zeb1 参加了断直肠癌的发生。随后使用生存曲线标明个基因在结直肠癌中与生存预后的联系。定论：结果标明 m6A/RP11/Zb1 轴触发结直肠癌在体内增殖。
整体研讨思路：
