师兄今日闲来无事搜文献读 （对，师兄的喜好便是做试验，读文献），把热点都搜了下，看到了一个非常了解的通讯作者： 吴缅（Wu M）。
2018 年 2 月和 4 月已发两篇高分 lncRNA 文章，一篇 Nature Cell Biology，一篇 PNAS！
大家都知道发 1~3 分的文章，测个序，做个表型试验还是比较 easy 的；3~5 分就需要对分子机制做初步的探究了，略微费点事儿；5~8 分的文章那就得花不少钱弄清分子机制，拼拼联系也是可以达到的。但是 10 分以上的文章那就得实打实地靠科研实力了。那么吴缅是谁 ？ 吴缅是谁？
许多童鞋或许没见过吴缅教授这样的大神。
为什么说师兄较为了解呢？是因为师兄 2 年前，有幸在吴缅教授办公室倾听吴老对自己试验室的介绍，以及多年来和国内外试验室协作的经历和成果，可谓硕果累累，师兄一起也学习到了老一辈科学家几十年来对科研精神的深厚了解和坚持，不仅要在传统研讨方向上扩展广度，还要在新的涌现的热点上与时俱进，提升研讨深度。
吴缅，教授，博士生导师，中科院百人方案引进人才。
1982 年本科毕业于南京师范大学生物系，后来获得美国哥伦比亚大学生物化学硕士、博士，1988-1990 美国哈佛大学细胞发育系的博士后。1991-2006，吴教授一直在新加坡高校任职；2006 年至今，中国科学技术大学生命科学学院“百人方案”特聘教授。
咱们今日就来讲一讲吴缅教授试验室的这篇 20 分的 Nature 子刊文章“GUARDIN is a p53-responsive long non-codingRNA that is essential for genomic stability”，到底讲的啥。
期刊：Nature Cell Biology（IF=20）
Online 时刻：2018.4
故事梗概：众所周知由 TP53 基因编码的 p53 蛋白生物学范畴里的“刘德华”，知名度甚高，在 PubMed 中，有关 p53 蛋白的文章就超过了 5 万篇。p53 蛋白实际上是一种转录因子，在细胞处于应激状态时可被诱导表达，然后促进细胞进入细胞周期的阻滞阶段，继而凋亡或许衰老。那么 p53 蛋白所诱导表达的下流 lncRNA 毫无疑问也是一大科研热点。
咱们都知道当细胞遭受到外界有害影响时，染色体或许会被损害发生断裂，细胞主要经过两种手法，即 DNA 损害修正和细胞凋亡，来维护其正常的生理功用和安稳的遗传性状。要保持基因组的安稳性，就需要对这些错误进行辨认、修正，必要时还要经过凋亡清除包含严重差错的细胞，或许错误骤变太多来不及修正就有或许导致癌变。
而 p53 蛋白调控着细胞损害之后的修正以及基因组安稳性，而 p53 下流的 lncRNA 是否参加基因组的安稳性调控尚没有报道。
1. lncRNA GUARDIN 有 p53 调控转录发生（定性检测和定量检测）
作者经过过表达 p53 基因的方法，做了 lncRNA 芯片检测，经过 q -PCR 确认了 5 个 lncRNA，例如 lincRNA-p21、DINO 等，而这两个已经被报道过了确实是 p53 呼应 lncRNA。而其中一条 lncRNA RP3-510D11.2- 1 作者后来命名为 GUARDIN，作者又再次经过敲减以及过表达的方法在三株肿瘤癌细胞株中进行了表达水平上的验证（如下）
定性判定：过表达和敲减后，GUARDIN 的表达状况
定量判定：参加阿霉素或许过表达癌基因 HRAS 后，p53 和 GUARDIN 随着时刻轴的表达状况
2. lncRNA GUARDIN 的功用试验：敲减后的细胞和动物表型
在癌肿瘤细胞中敲减 GUARDIN 后，检测细胞的增殖、搬运和侵袭表型，并做皮下肿瘤模型。
3. GUARDIN 的分子机制？细胞定位、ceRNA 预测、荧光素酶试验
细胞定位运用胞质和胞核分离后的 q -PCR 验证，然后通 miRDB(http://www.mirdb.org/miRDB)数据库预测 miRNA 以及下流的靶基因 TRF2，而且准确计算了 GUARDIN 和 miR-23a 的数量状况；
作者经过敲减和过表达 GUARDIN，加上 miR-23a 的 inhibitors 组验证对下流 TRF2 的调控表达状况，验证其契合 ceRNA 的机制。
4. 然鹅，你就想发文章毕业了？休想！再找一条机制出来！GUARDIN 经过空间结构结合 BRCA1 和 BARD1，然后进步 BRCA1 的安稳性。
那么怎样找呢呢？CeRNA 确认了，能否找一下 GUARDIN 作为蛋白质结合 RNA 上面的效果，首先想到的便是做质谱（MS）剖析，RNA pulldown 拉取 GUARDIN，然后 MS 剖析其结合的蛋白质种类，反过来再用 RIP 验证 BRCA1 和 BARD1 可以和 GUARDIN 相结合。
而敲减了 GUARDIN 之后，BRCA1 蛋白的表达量降低，而泛素化试验证明，泛素化在其中起到调控效果，也便是说没有了 GUARDIN 的维护效果 BRCA1 蛋白被泛素化降解。
那么最终就构成这样的一个分子机制：细胞损害→p53 高表达→GUARDIN→ceRNA 调控 TRF2+ 降低 BRCA1 的泛素化→细胞基因组安稳性→细胞损害修正，细胞存活。
词语引荐：
Responsive：由 ….. 发生或许调控
we demonstrate that the p53-responsive lncRNA GUARDIN…..，
Sequester：[法]扣押
GUARDIN is necessary for preventing chromosome end-to-end fusion through
maintaining the expression of telomeric repeat-binding factor 2 (TRF2) by sequestering microRNA-23a. 意同“Sponge”
Dependent：依靠的
Indicating that GUARDIN induction during the DDR was p53 dependent
